Produktion des Insektenmetalloprotease Inhibitors in Escherichia coli

Viac o knihe

Die Bekämpfung antibiotikaresistenter Krankheitserreger könnte durch antimikrobielle Peptide (AMPs) unterstützt werden, insbesondere solche aus Insekten, die vielversprechende pharmazeutische Kandidaten sind. Für klinische Studien ist eine Produktion der AMPs in ausreichenden Mengen und hoher Reinheit erforderlich. Die rekombinante Proteinproduktion mit Escherichia coli (E. coli) ist etabliert, jedoch besteht bei AMPs das Risiko einer toxischen Wirkung auf den Expressionsorganismus. Ziel dieser Arbeit war es, eine Methodik zu entwickeln, die AMPs in unlöslichen inclusion bodies (IBs) akkumuliert, um den Expressionsorganismus vor Toxizität zu schützen. Zudem sollte die Produktaufarbeitung der IBs im Vergleich zu klassischen Methoden vereinfacht und standardisiert werden. Hierfür wurde ein pull-down tag verwendet, das die Akkumulation von Zielproteinen in IBs fördert und eine pH-abhängige Resolubilisierung ermöglicht. Zur Evaluierung der IB-basierten Produktion und Aufarbeitung wurde der Insektenmetalloprotease-Inhibitor (IMPI) als AMP gewählt. Die pH-abhängige Resolubilisierung der IMPI-IBs war erfolgreich, und bioaktiver IMPI konnte sowohl nach löslicher als auch nach IB-basierter Produktion in E. coli isoliert werden.